2010年生物化學復習要點：瘧原蟲培養(yǎng)

　　瘧原蟲培養(yǎng)可以分紅細胞內(nèi)期和紅細胞外期。紅細胞內(nèi)期培養(yǎng)中四種人體瘧原蟲僅惡性瘧原蟲可以成功地在體外長期培養(yǎng)。

　　瘧原蟲培養(yǎng)比較復雜，需要“O”型人紅細胞、人血清及由3%氧氣、4%二氧化碳和93%氮氣組成的氣體充在培養(yǎng)瓶內(nèi)。當然還需要基本的培養(yǎng)液例如RPMI1640等，而且必須每天更換。整個培養(yǎng)系統(tǒng)也必須是無菌狀態(tài)的。這里例舉一種培養(yǎng)方法：取新鮮“O”型抗凝全血，離心使血清與紅細胞分離開來。轉(zhuǎn)自環(huán) 球 網(wǎng)校edu24ol.com

　　血清按一次需要量分裝于小容量的無菌瓶或試管中，-20℃保存。紅細胞以RPMI1640洗滌三次后，懸浮在等量的含10%人血清的RPMI1640中，4℃保存，可使用2～3周。市售的RPMI1640液體培養(yǎng)液或粉末培養(yǎng)基溶解過濾滅菌后，加入HEPES和谷胱苷肽，使最終濃度分別為25mmol和0.6%，成為完全的RPMI1640的培養(yǎng)液。

　　培養(yǎng)時取病人血，以RPMI1640洗滌2次，再加入含15%人血清的完全RPMI1640培養(yǎng)液，使再成為含量約為0.2%～0.4%的懸液。取懸液8ml置35cm2(70ml)無菌細胞培養(yǎng)瓶中，再加入紅細胞懸液，使其最終成為3%～5%紅細胞懸液，充入上述混合氣體，緊蓋瓶蓋，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一般24小時更換培養(yǎng)液一次。換液時盡量不晃動細胞層，不觸及紅細胞，以消毒吸管除去老培養(yǎng)液。加入等量新鮮的含15%人血清的完全RPMI1640培養(yǎng)液后再輕輕懸浮細胞，37℃繼續(xù)培養(yǎng)。同時定時吸取少量沉淀細胞涂成簿血片，姬氏染色，了解蟲體生長情況。紅細胞外期的培養(yǎng)惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲可以成功。

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