初級檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo)：熒光抗體技術(shù)

　　初級檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo)：熒光抗體技術(shù)

　　熒光抗體技術(shù)

　　(1)熒光抗體的制備和鑒定

　?、倏贵w熒光素標(biāo)記：用于標(biāo)記抗體，要求是高特異性和高親和力的。作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求：

　　1)應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。2)熒光效率高，與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。3)熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。4)與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。5)標(biāo)記方法簡單、安全無毒。6)與蛋白質(zhì)的結(jié)合穩(wěn)定，易于保存。常用的標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。

　?、跓晒饪贵w的鑒定：包括效價(jià)及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率?？贵w效價(jià)可以用瓊脂雙擴(kuò)散法進(jìn)行滴定，效價(jià)大于1：16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率(F/P)來計(jì)算。F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1.5為宜，用于活細(xì)胞染色的以F/P=2.4為宜。

　　(2)免疫熒光顯微技術(shù)：是使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行反應(yīng)，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。

　　①標(biāo)本的制作：主要靠觀察切片標(biāo)本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。

　　②熒光抗體染色：滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體進(jìn)行染色。

　　③熒光顯微鏡檢查：最好在染色當(dāng)天即作鏡檢，以防熒光消退，影響結(jié)果。

　?、軐?shí)驗(yàn)的類型：包括直接法、間接法、補(bǔ)體結(jié)合法和雙標(biāo)記法。

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