初級檢驗技師考試輔導(dǎo):免疫細(xì)胞的分離
更新時間:2010-12-20 13:39:18
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初級檢驗技師考試輔導(dǎo):免疫細(xì)胞的分離
免疫細(xì)胞的分離
(1)外周血單個核細(xì)胞的分離
外周血中單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)的比重與紅細(xì)胞、多核白細(xì)胞及血小板不同,介于1.075~1.090之間,因而可利用一種比重介于1.075~1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心,使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。
(2)淋巴細(xì)胞的分離
1)純淋巴細(xì)胞群的采集:利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時,能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性,從單個核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞,從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有:①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。
2)淋巴細(xì)胞亞群的分離原則:選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法,而選擇性去除不要的細(xì)胞,僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇法。常用的方法包括:①E花環(huán)沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結(jié)合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。
(3)淋巴細(xì)胞的保存與活力測定
①短期保存技術(shù):短期保存可置于4℃保存。
?、陂L期保存技術(shù):液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞,加入二甲亞砜作為保護劑。
?、刍盍y定:最簡便常用的為臺盼藍染色法,呈藍色。
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