初級檢驗技士輔導(dǎo):霍亂弧菌的檢驗方法
初級檢驗技士輔導(dǎo):霍亂弧菌的檢驗方法 $lesson$
檢驗方法及鑒定
1)直接鏡檢:
動力觀察:采取病人“米泔水樣”大便或嘔吐物制成懸滴片,觀察細(xì)菌動力,可見流星或穿梭狀動力的細(xì)菌。
制動試驗:取病人“米泔水樣”大便標(biāo)本或6小時蛋白胨水增菌液中發(fā)現(xiàn)運動活潑的弧菌,可再做一張涂片,加一滴不含防腐劑的霍亂多價診斷血清(效價1:64),用暗視野鏡觀察,3分鐘內(nèi)最初活潑的弧菌被凝集,運動被抑制,即為陽性,則可鑒定。
涂片染色:取標(biāo)本涂片2張,干燥后用乙醇固定,分別用革蘭染色及1:10稀釋復(fù)紅染色,鏡檢有無革蘭氏陰性,并成魚群狀排列的弧菌。
2)細(xì)菌分離培養(yǎng)
?、僦苯臃蛛x培養(yǎng):急性期患者米泔水樣糞便標(biāo)本,除增菌外可同時將標(biāo)本分離培養(yǎng),常可獲得陽性結(jié)果。分離用的培養(yǎng)基有強、弱2種選擇培養(yǎng)基。弱選擇培養(yǎng)基如堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂,抑制能力弱,糞便中某些雜菌仍可生長。強選擇性培養(yǎng)基常用的有慶大霉素瓊脂等。現(xiàn)多采用堿性蛋白胨水增菌,再用強選擇培養(yǎng)基進行分離。
?、谠鼍蠓蛛x培養(yǎng):來自帶菌者或恢復(fù)期患者的標(biāo)本,因含菌量少必須先增菌后分離??蓪?biāo)本接種于堿性蛋白胨水內(nèi),置35℃增菌6-8小時后分離培養(yǎng),必要時可做二次增菌后再進行分離培養(yǎng)。
3)鑒定:
根據(jù)霍亂弧菌在各種選擇培養(yǎng)基上的特點,挑選可疑菌落進行鑒定。鑒定以血清學(xué)(玻片凝集)為主,結(jié)合形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)作出判斷。必要時作其他試驗以便與其他細(xì)菌進行鑒別。
?、俨F囼灒簭姆蛛x培養(yǎng)基上挑取可疑菌落于霍亂弧菌多價診斷血清(效價1:32-1:64)作玻片凝集試驗。立即出現(xiàn)凝集者為陽性,同時設(shè)生理鹽水和陽性細(xì)菌株對照。
?、谛螒B(tài)學(xué)檢查:取純培養(yǎng)物涂片革蘭氏染色,觀察菌體形態(tài)及染色性。用懸滴法或半固體穿刺法檢測動力。
③生化反應(yīng):霍亂弧菌氧化酶試驗、吲哚試驗、粘絲試驗和霍亂紅試驗均陽性。
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