初級檢驗技師輔導：糞便化學法隱血試驗
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初級檢驗技師輔導：糞便化學法隱血試驗 $lesson$
化學檢查
一 、隱血試驗
隱血是指消化道出血量很少，肉眼不見血色，而且少量紅細胞又被消化分解放致顯微鏡下也無從發(fā)現(xiàn)的出血狀況而言。
[方法學評價] 隱血試驗(occult blood test,OBT)
1、 目前主要采用化學法
如鄰聯(lián)甲苯胺法、還原酚酞法、聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法,無色孔雀綠法、愈創(chuàng)木酯法等。
實驗設計原理 基本于血紅蛋白中的含鐵血紅素部分有催化過氧化物分解的作用，能催化試劑中的過氧化氫，分解釋放新生態(tài)氧，氧化上述色原物質而呈色。呈色的深淺反映了血紅蛋白多少，亦即出血量的大小。
靈敏度 以上試驗方法雖然原理相同，但在實際應用中卻由于糞便的成分差別很大，各實驗室具體操作細節(jié)如糞便取材多少，試劑配方、觀察時間等不同，而使結果存在較大差異。
多數(shù)文獻應用稀釋度的血紅蛋白液對這些方法靈敏度的研究表明，鄰甲苯胺法、還原酚酞法最靈敏，可檢測出0.2-1mg/L的血紅蛋白，只要消化道有1-5ml的出血就可檢出。
還原酚酞法由于試劑極不穩(wěn)定，放置可自發(fā)氧化變紅而被摒棄。
高度靈敏的鄰聯(lián)甲苯胺法常容易出現(xiàn)假陽性結果，中度靈敏的試驗包括聯(lián)苯胺法、無色孔雀綠法，可檢出1-5mg/L的血紅蛋白，消化道有5-10ml出血即為陽性。
聯(lián)苯胺法由于有致癌作用而無色孔雀綠法在未加入異喹啉時靈敏度差，需(6-10mg/L血紅蛋白，)試劑配制和來源均不如匹拉米洞方法方便。愈創(chuàng)木酯法靈敏度低，需6-10 mg /L血紅蛋白才能檢出，此時消化道出血可達20ml。但假陽性很少，如此法為陽性，基本可確診消化道出血。
目前國內外生產(chǎn)應用四甲基聯(lián)苯胺和愈創(chuàng)木酯為顯色基質的隱血試帶，使隱血試驗更為方便，但未根本解決隱血試驗方法學中的問題。
以上各種隱血試驗化學法雖簡單易行，但均基于血紅蛋白中的血紅素可促使雙氧水分解釋放新生態(tài)氧，使色原物質氧化這一原理，方法上缺乏特異準確性。此外化學試劑不穩(wěn)定，久置后可使反應減弱。外源性動物儀器如含有血紅蛋白，肌紅蛋白、其血紅素的作用均可使試驗呈陽性，大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物酶也可催化雙氧水分解，出現(xiàn)假陽性反應，所以除愈創(chuàng)木酯法外均要求素食3天，為此有人提出將糞便用水作1：3稀釋加熱煮沸再加冰乙酸和乙醚提取血紅蛋白測定可排除干擾。此法雖然可靠，但不適用于常規(guī)工作。加上血液如在腸道停留過久，血紅蛋白被細菌降解，血紅素不復存在，則會出現(xiàn)與病情不符的陰性結果，病人服用大量維生素C或其它具有還原作用的藥物，此實驗中可使過氧化物還原，不能再氧化色原物質，亦可使隱血試驗呈假陰性。除上述干擾隱血試驗，亦可由于檢驗人員取材部位不同，標本反應時間不同，檢驗員對顯色判斷不同，故在不同一方法的試驗中，還可產(chǎn)生誤差等，致使目前國內外尚無統(tǒng)一公認的推薦的方法，更談不到實驗的標準化。