初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：衣原體的微生物檢驗(yàn)

　　初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：衣原體的微生物檢驗(yàn) $lesson$

　　微生物檢驗(yàn)

　　1、標(biāo)本采集與處理

　　(1)沙眼衣原體：

　　沙眼和包涵體結(jié)膜炎病人，用拭子在結(jié)膜上穹窿部涂擦或瞼結(jié)膜病灶刮片。

　　子宮頸炎取子宮頸刮片上皮細(xì)胞或分泌物做涂片。

　　性病淋巴肉芽腫患者，可采取腹股溝淋巴結(jié)膿汁，也可取直腸拭子或活檢材料送檢。

　　(2)鸚鵡熱衣原體

　　采集患者血液、痰液或咽喉含漱液。尸體材料取肝、脾、肺等組織，也可采腹腔和心包滲液。

　　(3)肺炎衣原體

　　一般利用拭子經(jīng)鼻前庭插入鼻腔咽部，旋轉(zhuǎn)后取出，利用轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基冷藏送檢。也可采集氣管內(nèi)痰液或肺泡灌洗液。

　　2、直接顯微鏡檢查

　　染色鏡檢，尋找上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的包涵體。包涵體指在易感細(xì)胞內(nèi)含增殖的始體和子代原體的空泡。根據(jù)包涵體的形態(tài)、在細(xì)胞內(nèi)的位置及染色性等特征，對(duì)鑒別衣原體有意義。

　　(1)吉姆薩染色：原體呈紫紅色，始體呈藍(lán)色，包涵體呈深藍(lán)色。

　　沙眼衣原體原體包涵體密度低，呈空泡形。

　　鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體包涵體呈深密度的卵圓形，肺炎衣原體在HeLa細(xì)胞中的包涵體形態(tài)與鸚鵡熱衣原體相似，但不像鸚鵡熱衣原體具有多形性。

　　(2)碘液染色：

　　標(biāo)本經(jīng)甲醛固定后，用Lugol碘液染10分鐘，水洗后鏡檢。因包涵體的基質(zhì)含有豐富的糖原，可被碘液染成深褐色，而細(xì)胞的其他部分呈黃色。

　　沙眼衣原體含糖原，碘液染色陽(yáng)性。

　　鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體碘液染色陰性。

　　(3)可利用抗LPS單抗進(jìn)行直接熒光抗體染色檢測(cè)上皮細(xì)胞內(nèi)的衣原體抗原。

　　3、酶免疫檢測(cè)：

　　能在數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)出衣原體可溶性抗原，并適用于同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本。

　　4、核酸檢測(cè)

　　按外膜蛋白(MOMP)基因序列或其他種、型特異性的核酸片斷，構(gòu)建特異性引物或探針，利用PCR、核酸探針技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。按16SrRNA基因序列設(shè)計(jì)引物一般具有屬特異性。

　　5、分離培養(yǎng)

　　各種衣原體均可在雞胚卵黃囊和組織細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖，鸚鵡熱衣原體常用小鼠分離。

　　(1)雞胚卵黃囊接種：將檢查臨床標(biāo)本加適當(dāng)?shù)目股?如鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素等)處理后接種雞胚卵黃囊分離培養(yǎng)，35℃孵育，觀察至13天，收獲卵黃囊涂片，作吉姆薩染色，鏡檢原體。

　　(2)細(xì)胞培養(yǎng)：目前常用的細(xì)胞有兩種：即經(jīng)X線照射的McCoy細(xì)胞和HeLa細(xì)胞。不同的衣原體有各自最適合的培養(yǎng)細(xì)胞系。

　　沙眼衣原體多用McCoy細(xì)胞，鸚鵡熱衣原體適合HeLa229細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)。肺炎衣原體適合用HEP-2和HL細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)。

　　(3)小白鼠接種：小白鼠對(duì)不同種衣原體的敏感性不同，對(duì)沙眼衣原體不敏感，主要用于鸚鵡熱衣原體的分離。用小鼠腹腔、顱內(nèi)或滴鼻接種。

　　6、檢測(cè)抗體：用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、微量免疫熒光法、酶免法檢測(cè)抗體。

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