2013年初級檢驗技師考試：HLA血清學(xué)定型試驗

更新時間：2012-10-26 10:05:20 來源：|0

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點擊進(jìn)入：2013年檢驗技師考試時間：5月18、19、25、26

　　HLA-A、B、C、DR或DQ位點的抗原可用血清方法進(jìn)行檢測，所以稱為SD抗原(serologicallydefinedantigen)，其檢測方法目前普遍采用補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒(complementdependentcytotoxicyty，CDC)試驗。

　　1.試驗方法美國國家衛(wèi)生研究院(NIH)的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清(1μl/孔)按設(shè)計好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中(如暫時不用可以冰凍保存);加入待檢淋巴細(xì)胞2000個/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合;加入補(bǔ)體(多為家兔混合血清)5μl，置室溫60min;每孔加入5%伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色;3～5min后每孔加12%福爾馬林8μl固定細(xì)胞;待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過50個即為陽性反應(yīng)，說明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致;否則為不一致。

　　2.細(xì)胞分離檢測活體可取外周血直接分離;檢測尸體時取淋巴結(jié)，制成單個細(xì)胞并洗滌后再分離。檢測HLAⅠ類抗原時取單個核細(xì)胞層的細(xì)胞即可應(yīng)用，因為該層細(xì)胞都表達(dá)Ⅰ類抗原;但檢測HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時，就需要進(jìn)一步分離較純的B細(xì)胞(純度達(dá)80%以上)，因為Ⅱ類抗原不分布在T細(xì)胞上。

　　3.分型血清試驗用的標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦(尤其多產(chǎn)婦)的血清中篩選，胎盤液或其他體液也可應(yīng)用;也可通過人工免疫獻(xiàn)血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗，只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去，因試驗用的B細(xì)胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對人類的公共抗原而非某個體的HLA私有抗原;還有一個原因是鼠源性抗體多不能固定補(bǔ)體，不能用細(xì)胞毒方法進(jìn)行檢測。

　　4.HLA定型板某些專門實驗室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗時只須加入待檢細(xì)胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80%以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個實驗室認(rèn)可或有關(guān)部門核準(zhǔn)后才能銷售和使用;現(xiàn)在國內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測。

2013年衛(wèi)生專業(yè)技術(shù)資格考試報考條件

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