2013年檢驗(yàn)主管技師考試：自然殺傷細(xì)胞的檢測(cè)

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　　NK細(xì)胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD69等多種抗原，但均非NK細(xì)胞所特有，因此現(xiàn)今極少以CD系列抗原為指標(biāo)鑒定和計(jì)數(shù)NK細(xì)胞，而多檢測(cè)NK細(xì)胞活性。NK細(xì)胞株作為靶細(xì)胞，而測(cè)小鼠NK細(xì)胞活性則用YAC細(xì)胞株，檢測(cè)方法多種多樣，各有其優(yōu)缺點(diǎn)。

　　(一)酶釋法

　　檢測(cè)原則是將一定比例的效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞共溫一段時(shí)間后，離心沉淀，取上清液檢測(cè)靶細(xì)胞遭破壞后釋放的乳酸脫氫酶或堿性磷酸酶含量。本法經(jīng)濟(jì)、快速簡(jiǎn)便，但可定量。缺點(diǎn)是靶細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶含量低或因某些未死亡細(xì)胞能自行釋放，從而影響法靈敏度和特異性。此外乳酸脫氫酶分子較大，僅當(dāng)靶細(xì)胞膜完全被破壞時(shí)才釋放，故不能較早地反映效應(yīng)的功能。

　　(二)形態(tài)法

　　檢測(cè)原則是將效應(yīng)細(xì)胞與靶按一定比例混合共育，繼而臺(tái)盼藍(lán)或伊紅Y等活細(xì)胞拒染的染料處理，然后分別計(jì)數(shù)著染的死細(xì)胞和不著染的活細(xì)胞，由此推算NK的細(xì)胞的殺傷活性。本法簡(jiǎn)便，易于掌握，但判斷死細(xì)胞與活細(xì)胞不免帶有檢測(cè)者的主觀因素，也無(wú)法計(jì)數(shù)輕微損傷的細(xì)胞。

　　(三)化學(xué)發(fā)光法

　　檢測(cè)原則是當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞接觸時(shí)，效應(yīng)細(xì)胞呼吸爆發(fā)，生成極不穩(wěn)定的O2-和OH-等，放出光子，在發(fā)光劑存在的條件下，可被電倍增管接受和計(jì)數(shù)，發(fā)光量與NK細(xì)胞殺傷能力相關(guān)。

　　總之，檢測(cè)NK細(xì)胞活性的方法多種多樣，方法的簡(jiǎn)繁有很大差異，但敏感性和特異性亦異，從簡(jiǎn)單的活細(xì)胞計(jì)數(shù)直至最先進(jìn)的流式細(xì)胞儀分析，一般可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和具體條件選用。

　　(四)熒光法

　　檢測(cè)原則是用熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞，經(jīng)與效應(yīng)細(xì)胞共溫后，離心法上清，用熒光計(jì)檢測(cè)剩余的活靶細(xì)胞的熒光，缺點(diǎn)是活細(xì)胞釋放的熒光常被效應(yīng)細(xì)胞和培養(yǎng)液等所粹滅。另外，熒光分析法常遇細(xì)胞自然釋放率高，熒光本底強(qiáng)，影響靈敏度。為克服上述障礙，用時(shí)間分辨熒光免疫分析，將靶細(xì)胞用鑭系元素銪(Eu3+)的螯合物標(biāo)記，按同法與效應(yīng)細(xì)胞共溫后，用時(shí)間分辨熒光計(jì)檢測(cè)熒光，可除去非特異性熒光本底。本法實(shí)驗(yàn)時(shí)間短，效靶細(xì)胞僅需共溫2h，檢測(cè)速度快，特異性強(qiáng)。

　　檢測(cè)原則是將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞按一定比例混合溫育后，直接檢測(cè)靶細(xì)胞。分有靶細(xì)胞漿釋放法和胞核釋放法。

　　1.胞漿釋放法常用51Cr釋放法。51Cr透過(guò)細(xì)胞膜與胞漿中小分子蛋白質(zhì)結(jié)合，一旦細(xì)胞膜遭破壞，同位素隨蛋白質(zhì)外溢，并且不會(huì)被完整的細(xì)胞再度攝入。本法操作簡(jiǎn)便快速能定量，缺點(diǎn)是自然釋放率高，所需靶細(xì)胞數(shù)量多，51Cr半衰期短。近年有用111In(銦)檢測(cè)NK細(xì)胞活性，優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)記率高，用量微，以γ射線放射，可釋放90%的自身能量，比51Cr高10倍，自然釋放率低，僅為51Cr的一半。

　　2.胞核釋放法常用3H-TdR或125IudR作為DNA合成的前體物，可被攝入靶細(xì)胞核內(nèi)。當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞共溫后，用胰酸和DNA酶處理可使遭破壞的胞核內(nèi)容物釋放。本法自然釋放率比51Cr低，半衰期較長(zhǎng)，方法的敏感性高，故被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室所采用。

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