2014年臨床助理醫(yī)師醫(yī)學(xué)微生物學(xué)復(fù)習(xí)資料：病毒感染的檢查方法

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　　一、標(biāo)本的采集與送檢(principle of collection specimen)

　　1、采集急性期標(biāo)本

　　2 、污染標(biāo)本應(yīng)用抗生素抑制標(biāo)本中細(xì)菌或真菌的生長(zhǎng)

　　3 、低溫保存，快速送檢

　　4、 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢查抗體(雙分血清)

　　二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定

　　(一)病毒的分離培養(yǎng)

　　• 動(dòng)物接種 選擇易感動(dòng)物及接種部位，觀察發(fā)病情況

　　• 雞胚培養(yǎng) 不同病毒選擇不同接種部位(絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊)，分離流感病毒最常用。

　　• 細(xì)胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法

　　(1)原代細(xì)胞―來(lái)源于動(dòng)物、雞胚、人胚組織細(xì)胞，對(duì)多種病毒敏感，但只能傳2-3代。

　　(2)二倍體細(xì)胞―在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細(xì)胞。

　　(3)傳代細(xì)胞―能在體外無(wú)限傳代的細(xì)胞多由癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來(lái)。

　　病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)：

　　• 細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)：即某些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起的特有的細(xì)胞病變(細(xì)胞變圓、聚集、壞死、脫落等)

　　• 紅細(xì)胞吸附

　　• 干擾現(xiàn)象

　　• 細(xì)胞代謝改變(pH)

　　(二)病毒的鑒定

　　核酸類(lèi)型、理化性狀、形態(tài)、血清學(xué)鑒定、基因測(cè)序和生物對(duì)比。

　　(三)病毒的數(shù)量與感染性測(cè)定

　　1.50%組織細(xì)胞感染量

　　2.紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)

　　3.空斑形成試驗(yàn)

　　三、病毒的血清學(xué)診斷

　　用已知病毒抗原檢測(cè)病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾病(中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝抑制實(shí)驗(yàn)、凝膠免疫擴(kuò)散等)。

　　四、病毒的快速診斷

　　(一) 形態(tài)學(xué)

　　電鏡和免疫電鏡――直接觀察病毒

　　光鏡―― 大病毒 和包涵體

　　(二)檢測(cè)病毒蛋白抗原

　　用已知特異性抗體直接檢測(cè)病毒蛋白抗原(簡(jiǎn)便、敏感、特異)

　　常用方法：免疫熒光技術(shù)(IF)

　　固相放射免疫測(cè)定(SPRIT)

　　酶免疫技術(shù)(EIA)等。

　　(三) 檢測(cè)病毒特異性IgM抗體

　　檢測(cè)病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復(fù)制。

　　(四)檢測(cè)病毒的核酸

　　1 核酸雜交

　　? 斑點(diǎn)雜交(dot hybridization)

　　? 原位雜交(in site hybridization)

　　? DNA印跡雜交(Southern blot)

　　? RNA印跡雜交 (northern blot)

　　2 核酸擴(kuò)增

　　? 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction，PCR DNA)

　　? 連接酶鏈反應(yīng)(ligase chain reaction，LCR)

　　? 反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcrptase PCR，RT―PCR (RNA)

　　3 基因芯片技術(shù)(gene chip)

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